Human kinematic and morphometric sperm subpopulation analysis using CASA technology: A new approach to spermatozoa classification / Análisis cinemático y morfométrico de subpoblaciones de espermatozoides humanos utilizando tecnología CASA: un nuevo enfoque para la clasificación de los espermatozoides

Introduction: Semen analysis is a clinical method aimed at determining the fertility of a male individual. The traditional subjective method lacks the reliability that can be achieved by computer-assisted sperm analysis (CASA) technology. Unfortunately, this technology has only been used when taking into consideration individually different sperm characteristics. The aim of this work is to present an integrative mathematical approach that considers different seminal variables to establish human sperm subpopulations. Methods: Samples were obtained from thirteen volunteers via masturbation and were analyzed by the routine subjective method and two objective systems, CASA Motility (CASA-Mot) and CASA Morphology (CASA-Morph). Results: Seminogram variables were reduced to three principal components (PC) showing two subpopulations. Kinematics and morphometric variables each rendered three PCs for four subpopulations. Conclusions: These results lay the foundations for future studies including different geographical, social, ethnic and age range conditions with the aim of achieving a definitive view of the human semen picture. (AU)

Introducción: El análisis de semen es el método clínico para determinar la fertilidad masculina. El método subjetivo tradicional carece de la fiabilidad, que se puede obtener con el uso de la tecnología del análisis de semen asistido por ordenador (CASA). Desafortunadamente, esta tecnología se ha venido utilizando únicamente teniendo en cuenta de forma independiente las diversas características de los espermatozoides. El objetivo del presente estudio es presentar una aproximación matemática que incluye diversas variables seminales para definir las posibles subpoblaciones espermáticas. Métodos: Las muestras se obtuvieron por masturbación de 13 voluntarios, que se analizaron de forma subjetiva, así como con 2 sistemas objetivos, para el análisis de la movilidad (CASA-Mot) y la morfología (CASA-Morph). Resultados: Tanto las variables cinemáticas como las morfométricas rindieron 3 componentes principales y 4 subpoblaciones. Conclusión: Estos resultados sientan las bases para estudios futuros que incluyan diferencias geográficas, sociales, étnicas o de rango de edad con el ánimo de obtener una definición concluyente sobre las características seminales de la especie humana. (AU)

Human kinematic and morphometric sperm subpopulation analysis using CASA technology: A new approach to spermatozoa classification.

INTRODUCTION: Semen analysis is a clinical method aimed at determining the fertility of a male individual. The traditional subjective method lacks the reliability that can be achieved by computer-assisted sperm analysis (CASA) technology. Unfortunately, this technology has only been used when taking into consideration individually different sperm characteristics. The aim of this work is to present an integrative mathematical approach that considers different seminal variables to establish human sperm subpopulations. METHODS: Samples were obtained from thirteen volunteers via masturbation and were analyzed by the routine subjective method and two objective systems, CASA Motility (CASA-Mot) and CASA Morphology (CASA-Morph). RESULTS: Seminogram variables were reduced to three principal components (PC) showing two subpopulations. Kinematics and morphometric variables each rendered three PCs for four subpopulations. CONCLUSIONS: These results lay the foundations for future studies including different geographical, social, ethnic and age range conditions with the aim of achieving a definitive view of the human semen picture.

Aquios CL flow cytometer performance in the automated quantification of lymphocyte subpopulations / Desempenho do citômetro de fluxo Aquios CL na quantificação automatizada de subpopulações linfocitárias

ABSTRACT Flow cytometry (FC) is an essential tool for diagnosis, prognosis and therapeutic follow-up of several hematologic malignancies. In addition, it performs the quantification of lymphocytes subpopulations for diagnosis and monitoring of primary and acquired immunodeficiencies through the antigenic expressions of CD19 and CD20 for B lymphocytes; CD2, CD3, CD4, CD8 for T lymphocytes; and CD56 and CD16 for the identification of natural killer (NK) cells. The cytometry technique has revolutionized the way that the cells are identified, and over the years this platform has progressed with several advances in hardware and software that aim to improve workflow resulting in higher productivity, quality and cost savings. The Aquios CL - Beckman Coulter (BC) is an example of this advance because it is a complete automation instrument in flow cytometry called "Load & Go flow cytometer" for quantification of lymphocyte subpopulations in the routine diagnosis. In this study, the Aquios CL was validated, and quantification in frequency and absolute numbers of the lymphocyte subpopulations had an excellent correlation with the results obtained by the dual platform quantification performed in the Cytomics FC500 (BC) and automated Sysmex XE-2100 cell analyzer.

RESUMEN La citometría de flujo (CF) es una herramienta importante para diagnóstico, pronóstico y seguimiento terapéutico de diversas neoplasias hematológicas. Además, posibilita la cuantificación de las subpoblaciones linfocitarias (SPL) para asistencia diagnóstica y monitoreo de las inmunodeficiencias primarias y adquiridas a través de las expresiones antigénicas de CD19 y CD20 para linfocitos B; CD2, CD3, CD4 y CD8 para linfocitos T; y CD56 y CD16 para identificación de células natural killer (NK). La CF ha revolucionado la manera como las células son identificadas y, a lo largo de los años, esa plataforma ha progresado con diversos avances en hardware y software que aspiran a mejorar el flujo de trabajo resultando en mayor productividad, calidad y reducción de costos. El Aquios CL Beckman Coulter (BC) es un ejemplo de ese avance, pues es un instrumento de automación completa en CF (llamado Load & Go flow cytometer) para cuantificación de SPL en la rutina diagnóstica. En este estudio el Aquios CL fue validado, y la cuantificación en números relativos y absolutos de las subpoblaciones linfocitarias tuvo una excelente correlación con los resultados obtenidos por la cuantificación en plataforma dupla realizada en el Cytomics FC500 (BC) y en el analizador automatizado de células Sysmex XE-2100.

RESUMO A citometria de fluxo (CF) é uma ferramenta importante para diagnóstico, prognóstico e acompanhamento terapêutico de diversas neoplasias hematológicas. Além disso, possibilita a quantificação das subpopulações linfocitárias (SPL) para assistência diagnóstica e monitoramento das imunodeficiências primárias e adquiridas por meio das expressões antigênicas de CD19 e CD20 para linfócitos B; CD2, CD3, CD4 e CD8 para linfócitos T; e CD56 e CD16 para identificação de células natural killer (NK). A técnica de CF revolucionou a maneira como as células são identificadas e, ao longo dos anos, essa plataforma tem progredido com diversos avanços em hardware e software que visam melhorar o fluxo de trabalho, resultando em maior produtividade, qualidade e redução de custos. O Aquios CL - Beckman Coulter (BC) é um exemplo desse avanço, pois é um equipamento de automação completa em CF (denominado Load & Go flow cytometer) para quantificação de SPL na rotina diagnóstica. Neste estudo, o Aquios CL foi validado, e a quantificação em números relativos e absolutos das subpopulações linfocitárias teve uma excelente correlação com os resultados obtidos pela quantificação em plataforma dupla realizada no Cytomics FC500 (BC) e no analisador automatizado de células Sysmex XE-2100.

Determinación y cuantificación de subpoblaciones de linfocitos T y células natural killer en sangre periférica de individuos sanos por citometría de flujo / Detection and quantification of T-cell subpopulations and NK cells in peripheral blood from healthy individuals

Resumen Introducción: La determinación de las diferentes subpoblaciones de los linfocitos T en las diversas patologías y el monitoreo postratamiento ayuda a que el médico tome decisiones terapéuticas teniendo como referencia la cinética de los linfocitos T localizados en sangre periférica. Métodos: Se realizó la estandarización de un perfil de moléculas de superficie para la caracterización de subpoblaciones de linfocitos T: naïve, activados y de memoria, así como las células natural killer o asesinas naturales (CD3− CD56+) en sangre periférica de individuos clínicamente sanos. Resultados: Se identificaron las subpoblaciones de linfocitos: naïve (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L+, CCR7+), activados (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+ o CD45RO+, CD69+ y/o CRTAM+), efectores (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L−, CCR7−), de memoria central (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L+, CCR7+) y de memoria efectora (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L−, CCR7−) en las poblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+. Se integraron los datos obtenidos con estadística descriptiva (valores mínimos, valores máximos, media, mediana). Conclusiones: Este panel será de gran utilidad para monitorear pacientes en quienes se requiera valorar el estado inmunológico desde el punto de vista celular. Particularmente, puede apoyar en el seguimiento de los pacientes en los que se requiera evaluar la reconstitución inmunológica (componente celular de estirpe T).

Abstract Background: The knowledge of the participation of different subpopulations of T lymphocytes in various pathologies helps to make therapeutic decisions, having as reference the presence of the different subpopulations of the T lymphocytes associated with the disease. Methods: A profile standardization of surface molecules for the characterization of subpopulations of T cells was conducted: naïve, activated and memory, as well as natural killer (CD3− CD56+) cells in peripheral blood of clinically healthy individuals. Results: Naïve (CD3+, CD4+ or CD8+, CD45RA+, CD62L+, CCR7+), activated (CD3+, CD4+ or CD8+, CD45RA+ or CD45RO+, CD69+ and/or CRTAM+), effectors (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L−, CCR7−), central memory (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L+, CCR7+), memory effectors (CD3+, CD4+ or CD8+, CD62RO+, CD62L−, CCR7−) subpopulations were analyzed by flow cytometry. Descriptive statistics parameters were calculated (minimum values, maximum values, mean values, median). Conclusions: This panel can be very useful for monitoring patients in whom the immunological status from a cellular perspective is needed. Particularly, it can support the follow-up of patients who require an immunological reconstitution (T-cell component) evaluation.

Determinación y cuantificación de subpoblaciones de linfocitos T y células natural killer en sangre periférica de individuos sanos por citometría de flujo.

Background: The knowledge of the participation of different subpopulations of T lymphocytes in various pathologies helps to make therapeutic decisions, having as reference the presence of the different subpopulations of the T lymphocytes associated with the disease. Methods: A profile standardization of surface molecules for the characterization of subpopulations of T cells was conducted: naïve, activated and memory, as well as natural killer (CD3- CD56+) cells in peripheral blood of clinically healthy individuals. Results: Naïve (CD3+, CD4+ or CD8+, CD45RA+, CD62L+, CCR7+), activated (CD3+, CD4+ or CD8+, CD45RA+ or CD45RO+, CD69+ and/or CRTAM+), effectors (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L-, CCR7-), central memory (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L+, CCR7+), memory effectors (CD3+, CD4+ or CD8+, CD62RO+, CD62L-, CCR7-) subpopulations were analyzed by flow cytometry. Descriptive statistics parameters were calculated (minimum values, maximum values, mean values, median). Conclusions: This panel can be very useful for monitoring patients in whom the immunological status from a cellular perspective is needed. Particularly, it can support the follow-up of patients who require an immunological reconstitution (T-cell component) evaluation.

Introducción: La determinación de las diferentes subpoblaciones de los linfocitos T en las diversas patologías y el monitoreo postratamiento ayuda a que el médico tome decisiones terapéuticas teniendo como referencia la cinética de los linfocitos T localizados en sangre periférica. Métodos: Se realizó la estandarización de un perfil de moléculas de superficie para la caracterización de subpoblaciones de linfocitos T: naïve, activados y de memoria, así como las células natural killer o asesinas naturales (CD3− CD56+) en sangre periférica de individuos clínicamente sanos. Resultados: Se identificaron las subpoblaciones de linfocitos: naïve (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L+, CCR7+), activados (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+ o CD45RO+, CD69+ y/o CRTAM+), efectores (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L−, CCR7−), de memoria central (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L+, CCR7+) y de memoria efectora (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L−, CCR7−) en las poblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+. Se integraron los datos obtenidos con estadística descriptiva (valores mínimos, valores máximos, media, mediana). Conclusiones: Este panel será de gran utilidad para monitorear pacientes en quienes se requiera valorar el estado inmunológico desde el punto de vista celular. Particularmente, puede apoyar en el seguimiento de los pacientes en los que se requiera evaluar la reconstitución inmunológica (componente celular de estirpe T).

Análisis genétioo de la población de gatos del norte y sur de cali, Colombia / Genetic Analysis of the Cat Population of North and South of Cali, Colombia

Los marcadores genéticos del pelaje y malformaciones óseas han permitido caracterizar el perfil genético de más de 400 poblaciones del gato doméstico alrededor del mundo. Hace 15 años se estableció dicho perfil en la ciudad de Cali (Colombia). En este estudio se determinó si el norte y sur de Cali se comportan como subpoblaciones y se comparó el perfil total con el estudio pasado. Se encontró una disminución de la frecuencia alélica de a (no-agouti) y d (dilution), pero un aumento en cinco, especialmente en l (longhair) y c s (siamese). Dichas diferencias pueden atribuirse a la selección humana de características más atractivas y por el flujo génico resultante del crecimiento demográfico de la ciudad, lo que explicaría también el primer reporte de los alelos inhibitor y ticked abyssinian. Se evaluó el equilibrio Hardy-Weinberg para el norte, sur y las dos zonas juntas, usando los loci white spotting y orange, encontrándose desequilibrio en este último para las tres zonas evaluadas debido a un déficit de heterocigotos. Norte y sur se dividieron en dos, y cada sub-muestra presentó equilibrio Hardy-Weinberg, aunque las diferencias en las frecuencias alélicas y heterocigosidades resaltaron microestructura geográfica y una relación entre tiempo de fundación del barrio y heterocigosidad. Norte y sur resultaron ser una población y no subpoblaciones (F ST= 0,0004, D= 0,0017), al igual que las nueve poblaciones colombianas con las que se comparó la presente ciudad. Se sugiere realizar un análisis microgeográfico de flujo génico y la definición de posibles colonias de gatos en Cali.

The coat genetic markers and skeleton abnormalities have allowed characterize the profile from more than 400 domestic cat populations around the world. 15 years ago, that profile was established in the city of Cali (Colombia). In this study it was determined if north and south of the city are subpopulations and it was compared the total profile against past study. A decrease in allele frequency of a (non-agouti) and d (dilution) was found, but an increase of five alleles was found, especially in l (long hair) and c s (siamese). These differences could be attributed to human selection of more attractive characteristics and gene flow resulting from demographic growth city, which would also explain the first report of inhibitor and ticked abyssinian alleles. Hardy-Weinberg equilibrium was evaluated for the north, south and both areas together, using white spotting and orange loci, determining disequilibrium in orange for the three evaluated areas due to a heterozygotes deficit. North and south were divided into two, each sub-sample showed Hardy-Weinberg equilibrium, although allele frequencies and heterozygosities highlighted microgeographic structure and a relationship between founding time of the neighborhood and heterozygosity. North and south are a single population and aren´t subpopulations (F ST= 0,0004, D= 0,0017), as well as nine Colombian populations with which this city was compared. It is suggested to make a microgeographical gene flow analysis and the definition of possible cat colonies in Cali.